标准曲线是化学定量检测的基石,曲线质量直接决定样品数据是否可信。不少实验人员常会遇到截距异常、结果偏差大等问题。本文依据 GB/T22554-2010《基于标准样品的线性校准》,梳理标准曲线配制、布点、核验全套要点,方便检测同行直接对照实操。
实验室分析检测中的标准曲线是指一系列已知含量(浓度)的物质与仪器响应或信号之间的关系,数学处理就是曲线方程,图形表示就是标准曲线。标准曲线的目的是可以根据标准曲线查出待测物质的含量。
当我们得到一系列已知含量的物质的响应后,就会去建立函数关系,数学上称曲线拟合,一般最为常用的是直线拟合。
标准曲线的制作是按GB/T22554-2010《基于标准样品的线性校准》中的相关推荐需要注意以下几点:
(1)标准曲线的核心问题是找到能够确切浓度的标准物质或标准品。
(2)标准曲线的浓度范围应覆盖正常操作条件下的被测量范围,并且能涵盖你所要检测实验样品的浓度,若浓度过大可能会造成显色不完全或显色不在线性范围内,浓度过小可能造成显色达不到仪器的检测灵敏度。
(3)标准样品的组分尽量与被测样品组分一致,即待测样品需要进行预处理。
(4)标准样品的个数至少应有3个浓度,但为了标准曲线的准确性与可靠性,我们一般是除去零浓度至少做五个点。
(5)最好采用倍比稀释法配置标准曲线中的标准样品浓度,这样能够保证标准样品的浓度不会出现较大偏差。
(6)标准样品的浓度值应等距离的分布在被测量范围,最高浓度是最低浓度的10-20倍为宜。
标准曲线的检验最重要的三大检测项目:
(1)精密度检验:精密度检验就是看试验点距离拟合的直线的距离有无异常,所以也称线性检验。分光光度法一般要求相关系数R²≥0.9990,即达到三个9的要求。
(2)截距检验:即检验标准曲线的准确度,得出的线性回归方程y=a+bx,截距a与0作对比,a与0有差别说明有试剂空白或系统误差,但a与0不能有显著差异。
(3)斜率检验:即检验分析方法或仪器的灵敏度,在完全相同的分析条件下斜率b的变化不应超出一定的范围,分光光度法要求其相对差值小于5%。

