在高效液相色谱分析中，空白实验就像“基准标尺”——如果空白值偏高、莫名出峰，后续的样品数据再精密也可能失真。不少实验员都遇过类似困扰：空白值忽高忽低、空柱子走样出杂峰、乙腈进样出倒峰……今天就结合空白实验的核心知识，逐一解答这些高频问题。
01 国标定义
国标明确：空白试验是指除不加试样外，采用完全相同的分析步骤、试剂和用量（滴定法中标准滴定液的用量除外），进行平行操作所得的结果。其主要用途是扣除试样中试剂本底，以及计算方法的检出限。
02空白做不好的影响
空白试验测得的结果称为空白试验值。样品分析的最终结果，需用测得值减去空白试验值获得。作为实验室质量控制的关键环节，空白试验的准确性直接决定检测结果的准确度：
空白试验值反映了仪器噪声、试剂杂质、环境沾污、操作污染等因素的综合影响；
空白试验值越低、数据离散度越小，分析结果的精度越高，说明分析方法与操作者水平更可靠；
当空白试验值偏高时，需全面排查试验用水、试剂、量器容器沾污、仪器性能、实验环境等因素，尽可能降低空白值。
问题描述
高效液相色谱，色谱柱为Kromasil C18（15cm×5μm），流动相为10%乙腈+90%三氟乙酸水，走空白色谱柱时，在保留时间中间位置出现较大杂峰；多次进样空白，响应值波动（有时高有时低），但杂峰持续存在；用流动相冲洗后问题仍未解决，且不似色谱柱杂质导致。
排查原因
确认检测波长：若为末端吸收，首先排除三氟乙酸的干扰。
系统排查：使用100%乙腈作为流动相，以乙腈为样品进样。若基线平稳无杂峰，说明色谱柱及系统完好。
流动相排查：更换流动相为10%乙腈+90%三氟乙酸水，仍以乙腈为样品进样。若出现上述杂峰，大概率问题出在三氟乙酸或稀释三氟乙酸的水上。
仪器部件排查：若步骤2、3均出现杂峰，进一步检查检测器及进样器。
专业支持
若上述步骤均未解决问题，联系仪器工程师进行检修。
问题描述
高效液相色谱仪进空白乙腈时，在样品峰位置出现倒峰；进双蒸水时在样品峰位置出现正峰；进样品时有杂峰干扰。已排除水和乙腈本身的问题，怀疑进样池或检测器污染，但处理10多天仍无效果。
分析与解决思路
液相中出现倒峰，核心原因是样品吸收比流动相吸收小。排查需兼顾进样系统、检测器、流动相、色谱柱等多环节，步骤如下：
排除色谱柱影响：更换一根新的或已知完好的色谱柱试测。若杂峰/倒峰依旧存在，说明问题与色谱柱无关；若问题消失，则需对原色谱柱进行清洗或更换。
排除流动相影响：更换新配制的流动相试测，确认是否因流动相污染或配比异常导致问题。
排查检测器与进样系统：将色谱柱从系统中断开，直接用乙腈或水做流动相清洗检测器。若基线恢复正常，说明检测器未受污染，需进一步清洗进样系统（进样针、进样阀、定量环等）；若基线仍异常，则需拆解清洗检测器（如检测池）。
追溯其他环节：若上述步骤均未解决，检查样品前处理过程是否存在污染，或仪器内部管路是否有残留污染。
空白实验看似简单，实则是液相分析的“第一道防线”。从理解定义把握核心意义，到按逻辑排查出峰、值偏高问题，每一步细致操作都能为后续数据的准确性托底。遇到空白异常时，按流程拆解排查，远比盲目试错更高效。
